4-hydroxy-2-nonenal as a marker of the oxidative stress in brains of dogs with canine distemper / 4-hidroxi-2-nonenal como marcador de estresse oxidativo no cérebro de cães com cinomose

Canine Distemper is a disease caused by Canine morbillivirus (CM), a pantropic virus that can affect the central nervous system (CNS), causing demyelination. However, the pathogenesis of this lesion remains to be clarified. Brain samples of 14 naturally infected dogs by CM were analyzed to evaluate the presence of oxidative stress and demyelination. RT-PCR assay was performed to confirm a diagnosis of canine distemper in the brain, immunohistochemistry anti-CM was used to localize the viral proteins in the tissue, and anti-4-hydroxy-2-nonenal (4-HNE) was a marker of a product of lipid peroxidation. The results showed the presence of viral proteins in the demyelinated area with the presence of 4-HNE. Our results suggest that the CM virus infection causes oxidative stress leading to lipid peroxidation, which causes tissue damage and demyelination. In conclusion, oxidative stress plays a significant role in canine distemper pathogenesis in the CNS.(AU)

A cinomose canina é uma doença causada pelo Morbilivírus canino (CM), um vírus pantrópico que pode afetar o sistema nervoso central (SNC), causando desmielinização. No entanto, a patogênese dessa lesão não está totalmente esclarecida. RT-PCR e imuno-histoquímica foram realizadas para confirmação do diagnóstico de cinomose em amostras de encéfalo de 14 cães naturalmente infectados. Após confirmação, foi realizada uma avaliação do estresse oxidativo por imuno-histoquímica com uso de anti-4-hidroxi-nonenal (4HNE) como marcador de produtos resultantes da peroxidação lipídica. Os resultados sugerem que a infecção pelo CM causa estresse oxidativo no tecido, levando a peroxidação lipídica, a qual causa danos ao tecido, culminando com desmielinização. Conclui-se que o estresse oxidativo tem papel importante na patogênese da cinomose canina no sistema nervoso central.(AU)

Insumos de inmunohistoquímica Kit IHC D5F3, PD-L1 IHC 22C3 pharmDx y Dual-ISH / Immunohistochemistry supplies IHC D5F3 Kit, PD-L1 IHC 22C3 pharmDx and Dual-ISH

ANTECEDENTES: El cáncer de pulmón y mama se encuentran dentro de las neoplasias más frecuentemente diagnosticadas a nivel mundial. En la actualidad, la determinación del estatus mutacional en cáncer avanzado de pulmón (ALK, PD-L1 y EGFR) y en cáncer de mama (HER2) permite elegir el tratamiento de elección en cada paciente. - La hibridación por inmunofluorescencia in situ (FISH) es una técnica utilizada para detectar el rearreglo del gen ALK y el anticuerpo 22C3 para la detección de la expresión PD-L1 en pacientes con cáncer de pulmón avanzado. La prueba de hibridación in situ con fluorescencia (FISH) también es utilizada para la detección de la expresión HER2 cuando el estudio con inmunohistoquímica es dudoso en pacientes con cáncer de mama temprano o avanzado. Sin embargo, en la actualidad contamos con otras opciones diagnosticas con ventajas que potencialmente pueden ser superiores a los métodos estandarizados. METODOLOGÍA: La estrategia de búsqueda sistemática de información científica para el desarrollo del presente informe se realizó siguiendo las recomendaciones de la Pirámide jerárquica de la evidencia propuesta por Haynes y se consideró los siguientes estudios: Sumarios y guías de práctica clínica. Revisiones sistemáticas y/o meta-análisis. Ensayos Controlados Aleatorizados (ECA). Estudios Observacionales (cohortes, caso y control, descriptivos) No hubo limitaciones acerca de la fecha de publicación o el idioma para ningún estudio. DISCUSIÓN: Actualmente la determinación del estatus mutacional en cáncer de pulmón avanzado, permite elegir el tratamiento de elección en cada paciente. Revisiones sistemáticas/metaanálisis como los publicados por Ma H et al(2016) reporta que el KIT IHC D5F3 cuenta con una alta sensibilidad (97%) y especificidad (99%) para la detección del rearreglo ALK. Valores como el radio de probabilidad positiva (PLR) y el radio de probabilidad negativa (NLR) en 19.20 (95% CI: 57.79-245.89) y 0.03 (95% CI: 0,02-0,07), respectivamente, el DOR (Diagnostic Odds Ratio) de 3526,66 (IC del 95%: 1344,71-9249,03) y AUROC (Area Under the Receiver Operating Characteristic) de 1,00 (IC del 95%: 0,99-1,00) determinan la alta precisión diagnostica del método de inmunohistoquímica y la poca influencia que la prevalencia tiene en los resultados finales. Wynes MW et al y Guo L et al confirman la alta sensibilidad, especificidad y precisión diagnostica en sus estudios respectivos. Cabe mencionar además que la prueba de IHC amerita un tiempo de estudio menor (2-3 días) que el necesitado por FISH. Además, el costo por muestra estudiada con el KIT IHC D5F3 fue de S/. 117, mientras que la aplicación del FISH en cada muestra de tejido tiene un costo aproximado de S/. 1471. para estudiar la expresión del PD-L1 es controversial hasta la actualidad y si bien las limitaciones de cada ensayo IHC no permiten determinar una superioridad de una sobre la otra, Torlakovic et al (2020), reportan que PD-L1 IHC 22C3 pharmDx cuenta con una alta sensibilidad (100%) y especificidad (100%) para la detección del PD-L1. Koomen BM y colaboradores publicaron una revisión sistemática donde reportan una alta concordancia entre los métodos de diagnóstico 22C3, 28-8 y SP263. Antes, el Instituto Nacional de Enfermedades Neoplásicas (INEN) adquiría el anticuerpo para la determinación del PD-L1, sin embargo, por motivos extra médicos asociados a la accesibilidad del anticuerpo conllevan a la necesidad de adquirir el método diagnostico PD-L1 IHC 22C3 pharmDx, el cual tiene un costo de aproximadamente S/. 590 por cada muestra estudiada. La determinación de la expresión del HER-2 en las pacientes con cáncer de mama permite la elección de un tipo de tratamiento específico en esta población de pacientes. La prueba Dual-ISH HER2 es un método diagnostico con menor cantidad de estudios comparativos con FISH encontrados en nuestra revisión. Sin embargo, la publicación por Mansfield AS (2014) reporta que el Dual-ISH puede tener un nivel de concordancia de hasta el 83% con FISH. Una posterior evaluación arrojó que la sensibilidad y especificidad eran del 60% y 90%, respectivamente. Al igual que con KIT IHC D5F3 y PD-L1 IHC 22C3 pharmDx, las guías internacionales de práctica clínica también contemplan al Dual-ISH como una opción diagnóstica de la expresión del HER2 en pacientes con cáncer de mama. Con lo que respecta a costos, Dual-ISH tiene un costo menor, aproximadamente S/. 664 por cada muestra estudiada, mientras que FISH tiene un costo de S/. 1317. Finalmente, la aplicación de los métodos diagnósticos de inmunohistoquímica fue evaluada en reunión con el Panel de ETS y los representantes del Departamento de Patología; decidiéndose la aprobación de la aplicación del KIT IHC D5F3, PD-L1 IHC 22C3 pharmDx y Dual-ISH para HER2. CONCLUSIONES: El KIT ALK (D5F3) presenta una alta sensibilidad y especificidad para la detección del rearreglo ALK en cáncer de pulmón de células no pequeñas, amerita menor tiempo de análisis y menor costo que FISH. 2. PD-L1 IHC 22C3 pharmDx es un método con alta sensibilidad y especificidad para la detección de la expresión del PDL1, asociada además a una alta concordancia con otros ensayos de detección (22C3, 28-8 y SP263). 3. A pesar de la limitada evidencia, DISH cuenta con una alta especificidad, adecuada concordancia para la detección de la expresión HER2 y menor costo de estudio en comparación con FISH. 4. Por lo antes mencionado, el Panel de ETS, brinda aprobación de la aplicación del KIT IHC D5F3, PD-L1 IHC 22C3 pharmDx y Dual-ISH para HER2.

Expression of Vitamin D Receptor and Vitamin D Receptor Gene Polymorphisms (BsmI, FokI, and TaqI) in Patients with Pterygium / Expressão do gene do receptor da vitamina D e de seus polimorfismos (BsmI, FokI e TaqI) em pacientes com pterígio

ABSTRACT Purpose: This study aimed to determine the role of vitamin D receptor in the pathogenesis of pterygium. The vitamin D receptor eexpression levels in pterygium tissue, blood vitamin D levels, and frequency of selected vitamin D receptor gene polymorphisms (BsmI, FokI, and TaqI) were compared between patients with pterygium and healthy participants. Methods: The study included patients with pterygiumeee (n=50) and healthy volunteers (n=50). The serum vitamin D levels were measured for both groups. Immunohistochemical staining for vitamin D receptor ewas performed on sections obtained from the pterygium and adjacent healthy conjunctival tissues of the same individuals. The genomic existence of vitamin D receptor epolymorphisms (BsmI, FokI, and TaqI) were analyzed in DNA obtained from venous blood of participants using polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism methods. Results: There was no difference found between the serum vitamin D levels of patients with pterygium and healthy controls. However, tissue expression of vitamin D receptor was higher in the pterygium endothelial cells of micro-vessels (p=0.002), subepithelial stromal (p=0.04), and intravascular inflammatory cells (p=0.0001), in comparison with the adjacent healthy conjunctival tissue. Moreover, while the BBtt haplotype was 2-fold higher, the bbTt haplotype was 2.5-fold lower, and the BbTT haplotype was 2.25-fold lower in the control group than in the pterygium group (p<0.001). Conclusions: Vitamin D serum levels did not differ between the healthy and pterygium groups. Vitamin D receptor expression was increased in the pterygium tissue versus the adjacent healthy tissue. However, vitamin D receptor polymorphism analysis in patients with pterygium did not reveal any significant difference in BsmI, FokI, or TaqI polymorphisms in comparison with the healthy volunteers.(AU)

RESUMO Objetivo: Determinar o papel do receptor da vitamina D na patogênese do pterígio. Os níveis de expressão do receptor da vitamina D no tecido do pterígio, os níveis sanguíneos de vitamina D e a frequência de alguns polimorfismos do gene do receptor da vitamina D (BsmI, FokI e TaqI) foram comparados entre pacientes com pterígio e participantes saudáveis. Métodos: Foram incluídos pacientes com pterígio (n=50) e voluntários saudáveis (n=50). Os níveis séricos de vitamina D foram medidos em ambos os grupos. Foi feita uma coloração imuno-histoquímica para o receptor da vitamina D em cortes obtidos do pterígio e dos tecidos conjuntivais saudáveis adjacentes dos mesmos indivíduos. A existência de polimorfismos do receptor da vitamina D (BsmI, FokI e TaqI) no genoma foi analisada em DNA obtido do sangue venoso dos participantes, usando métodos de Polymerase chain reaction (PCR) e RFLP. Resultados: Não foi observada nenhuma diferença entre os níveis séricos de vitamina D dos pacientes com pterígio e os dos controles saudáveis. Entretanto, a expressão tissular do receptor da vitamina D foi maior nas células endoteliais dos microvasos do pterígio (p=0,002), nas células estromais sub-epiteliais (p=0,04) e nas células inflamatórias intravasculares (p=0,0001), quando comparada à expressão no tecido conjuntival saudável adjacente. Além disso, embora o haplótipo BBtt tenha sido duas vezes mais frequente, o haplótipo bbTt foi 2,5 vezes menos frequente e o haplótipo BbTT foi 2,25 vezes menos frequente no grupo de controle do que no grupo com pterígio (p<0,001). Conclusões: Os níveis séricos de vitamina D não apresentaram diferenças entre o grupo de pessoas saudáveis e o com pterígio. A expressão do receptor da vitamina D mostrou-se maior no grupo com pterígio do que no tecido saudável adjacente. Entretanto, a análise dos polimorfismos do receptor da vitamina D nos pacientes com pterígio não revelou qualquer diferença significativa nos polimorfismos BsmI, FokI ou TaqI em comparação com os voluntários saudáveis.(AU)

The human-in-the-loop: an evaluation of pathologists' interaction with artificial intelligence in clinical practice.

AIMS: One of the major drivers of the adoption of digital pathology in clinical practice is the possibility of introducing digital image analysis (DIA) to assist with diagnostic tasks. This offers potential increases in accuracy, reproducibility, and efficiency. Whereas stand-alone DIA has great potential benefit for research, little is known about the effect of DIA assistance in clinical use. The aim of this study was to investigate the clinical use characteristics of a DIA application for Ki67 proliferation assessment. Specifically, the human-in-the-loop interplay between DIA and pathologists was studied. METHODS AND RESULTS: We retrospectively investigated breast cancer Ki67 areas assessed with human-in-the-loop DIA and compared them with visual and automatic approaches. The results, expressed as standard deviation of the error in the Ki67 index, showed that visual estimation ('eyeballing') (14.9 percentage points) performed significantly worse (P < 0.05) than DIA alone (7.2 percentage points) and DIA with human-in-the-loop corrections (6.9 percentage points). At the overall level, no improvement resulting from the addition of human-in-the-loop corrections to the automatic DIA results could be seen. For individual cases, however, human-in-the-loop corrections could address major DIA errors in terms of poor thresholding of faint staining and incorrect tumour-stroma separation. CONCLUSION: The findings indicate that the primary value of human-in-the-loop corrections is to address major weaknesses of a DIA application, rather than fine-tuning the DIA quantifications.

Reactivos de inmunohistoquímica para el diagnóstico diferencial de pacientes oncológicos - neoplasias de tejidos blandos y hueso (sarcomas) / Immunohistochemical reagents for the differential diagnosis of cancer patients - soft tissue and bone neoplasms (sarcomas)

INTRODUCCIÓN: El Instituto Nacional de Enfermedades Neoplásicas (INEN), al ser la entidad de Perú de máxima complejidad para el manejo de enfermedades oncológicas, necesita contar con diversos exámenes de diagnóstico diferencial. 2. Consciente de ello, el Departamento del Equipo Funcional de Patología Quirúrgica y Necropsia del Instituto Nacional de Enfermedades Neoplásicas, realizó una solicitud de nuevos reactivos de inmunohistoquímica para diagnóstico oncológico. ESTRATEGIA DE BÚSQUEDA DE INFORMACIÓN: a) Pregunta Clínica: Sección: Cáncer de Pulmón: En pacientes con probable diagnóstico de Sarcoma de Ewing, ¿Cuál es la utilidad de la prueba inmunohistoquímica de NKX2.2? En pacientes con probable diagnóstico de Hemangioendotelioma Epitelioide, ¿Cuál es la utilidad de la prueba inmunohistoquímica de CAMTA 1? b) RECOLECCIÒN DE LOS MANUSCRITOS A REVISAR: Tipos de estudios: La estrategia de búsqueda sistemática de información científica para el desarrollo del presente informe se realizó siguiendo las recomendaciones de la Pirámide jerárquica de la evidencia propuesta por Haynes y se consideró los siguientes estudios: Sumarios y guías de práctica clínica. Revisiones sistemáticas y/o meta-análisis. Ensayos Controlados Aleatorizados (ECA) Estudios Observacionales (cohortes, caso y control, descriptivos). No hubo limitaciones acerca de la fecha de publicación o el idioma para ningún estudio. Fuentes de información: De acceso libre Bases de datos: Pubmed Fecha de búsqueda: La búsqueda sistemática incluyó a todos los estudios publicados sin límite de antigüedad. Términos de Búsqueda: Considerando la pregunta PICO se construyó una estrategia de búsqueda. Sin restricciones en el idioma ni en periodo de publicación. DISCUSIÓN: Tomando los criterios para un marco de valor de la Health Technology Assessment International (2018)24 para la toma de decisiones y formulación de la recomendación, se describe: La calidad de evidencia evaluada con clasificación GRADE para los marcadores Nkx2.2, CAMTA1, CDK4, BCOR, ETV4, NTRK, braquiuria tuvieron valoración de baja a muy baja. Esta valoración de la calidad indica que los valores diagnósticos encontrados pueden ser sustancialmente diferentes al efecto que pueda tener en el mundo real. La magnitud del beneficio es a favor, pues considerando que no existen pruebas en INEN que evalúen las patologías solicitadas (diagnósticos diferenciales en cáncer de tejidos blandos y hueso) pueden ser beneficiosos. Además, en algunos casos tener estos marcadores inmunohistoquímicos permitiría captar a pacientes con estas patologías y brindar un tratamiento más dirigido. El impacto económico de esta prueba para el INEN es incierto, es necesario realizar un análisis de impacto presupuestario para estimar cuantitativamente el gasto sanitario del uso de esta prueba en la población con cáncer de tumores sólidos localmente avanzado y metastásicos. La incorporación de esta tecnología supone un impacto probablemente positivo en la equidad al considerar que poblaciones con enfermedades frecuentes y poco frecuentes puedan ser atendidos y diagnosticados para un tratamiento adecuado, evitando el infradiagnóstico. Con respecto a todos los marcadores el área solicitante comentó que si bien los estudios aún muestran calidad baja y muy baja los reportes han demostrado que en la mayoría de casos estos marcadores aumentan su precisión, sensibilidad o especificidad cuando se agregan a un panel que es lo que ocurre en el INEN. También, se comentó que los marcadores que se van a utilizar en INEN están dirigidos a los diagnósticos que se han discutido el día de la reunión. Por otro lado, la inclusión de las pruebas diagnósticas a INEN (Instituto de mayor complejidad de cáncer en Perú) permitirá establecer nueva evidencia con respecto a la utilidad de estas pruebas en el contexto de la población peruana. CONCLUSIONES: El marcador NKX2.2 presenta una sensibilidad alta para distinguir los sarcomas de Ewing y una especificidad limitada por lo cual su utilidad mejora cuando es utilizado como parte de un panel que permita distinguir los Sarcomas de Ewing de otras neoplasias histológicamente miméticas. El marcador CAMTA1 ha reportado una sensibilidad aceptable y una alta especificidad en los estudios revisados y su utilidad está enfocada a distinguir hemangioendoteliomas epitelioides de otras muestras histológicamente similares. En el caso de CDk4, es particularmente útil para separar ALT-WDLPS del gran grupo de tumores adiposos diferenciados, y para distinguir DDLPS de sarcomas pobremente diferenciados sobre todo cuando está acompañado de marcador MDM2. En el caso de BCOR se encontró que su utilidad está enfocada en diferenciar sarcomas de células redondas o sarcomas renales de células claras. En el caso de ETV4 se encontró que la detección o diagnóstico diferencial de tumoraciones de la familia de sarcomas de Ewing (ESFT) aumenta cuando se combinan los marcadores NKX2.2, ETV4 y BCOR IHC para distinguir los ESFT de los sarcomas asociados a CIC o BCOR. El marcador NTRK es permite establecer un diagnóstico diferencial en casos de fibrosarcoma infantil y permite diferenciar esta enfermedad de otros tumores neurales de tipo lipofibromatosos. Braquiuria es un marcador útil para establecer el diagnóstico de cordoma y su utilidad aumenta cuando se agrega a un panel de marcadores clásicos. Por lo expuesto, la UFETS en consenso con el Comité de ETS, emite opinión favorable para el uso de la tecnología del marcador Nkx2.2 para distinguir sarcomas de Ewing, CAMTA1 para distinguir hemangioendoteliomas epitelioides, CDk4 para distinguir sarcomas de tipo WDLPS y DDLPS, BCOR en la identificación de sarcomas de células redondas o sarcomas renales de células claras, ETV4 dentro de un panel de identificación de la familia de Sarcomas de Ewing y NTRK cuando se evalúe a un probable fibrosarcoma infantil y tumores neuronales de tipo lipofibromatosos y el marcador de brauquiuria para establecer el diagnóstico diferencial en casos probables de cordomas.

Reactivos de inmunohistoquímica para diagnóstico oncológico - Ovario/Cuello uterino / Immunohistochemical reagents for cancer diagnosis - Ovary / Cervix

INTRODUCCIÓN: El Departamento del Equipo Funcional de Patología Quirúrgica y Necropsia del Instituto Nacional de Enfermedades Neoplásicas, en relación a nuevos reactivos de inmunohistoquímica para diagnóstico oncológico, ha solicitado la opinión técnica de la UFETS. Las neoplasias de ovario son la novena causa de cáncer en la población femenina, tienen una variedad de subtipos, comportamiento y también difieren en el manejo que se les puede brindar. Por tal razón un diagnóstico preciso de estas es necesario. En los últimos años han surgido nuevos marcadores que ayudan en la mejora de la detección de estas neoplasias, dentro de las que se encuentran: FOXL2, SF1 y HNF1Beta. En los casos de Tumores de la Granulosa difuso del adulto en los cuales haya duda diagnóstica versus un Fibroma de Ovario, la detección molecular de FOXL2 ha mostrado una alta sensibilidad y especificidad. Sin embargo, su expresión en la IHQ no es del todo precisa. Al tratarse nuestra institución un centro de referencia, la adquisición de este reactivo podría hacer que se realicen estudios que permitan valorar estos resultados. ESTRATEGIA DE BÚSQUEDA DE INFORMACIÓN: a) Pregunta Clínica: Sección A: Cáncer de Ovario: Tumores de la Granulosa: En la población con Tumores de la Granulosa, ¿Cuál es la utilidad del marcador FOXL2 como diagnóstico oncológico? Tumores Estromales/Cordón Sexual: En la población con tumores estromales/cordón sexual, ¿Cuál es la utilidad del marcador SF-1 como diagnóstico oncológico? Carcinomas de Células Clara: En la población con carcinoma de células claras de ovario, ¿Cuál es la utilidad del marcador HNF - 1 Beta como diagnóstico oncológico? Sección B: Cáncer de Cuello Uterino: Lesiones Intraepiteliales: En la población con lesiones intraepiteliales, ¿Cuál es la utilidad del marcador P16/KI67 cocktail como diagnóstico oncológico? b) Recolecciòn de los Manuscritos a Revisar: Tipos de estudios: La estrategia de búsqueda sistemática de información científica para el desarrollo del presente informe se realizó siguiendo las recomendaciones de la Pirámide jerárquica de la evidencia propuesta por Haynes y se consideró los siguientes estudios: Sumarios y guías de práctica clínica. Revisiones sistemáticas y/o meta-análisis. Ensayos Controlados Aleatorizados (ECA). Estudios Observacionales (cohortes, caso y control, descriptivos) No hubo limitaciones acerca de la fecha de publicación o el idioma para ningún estúdio. Considerando la pregunta PICO se construyó una estrategia de búsqueda. Sin restricciones en el idioma y publicadas en los últimos 10 años. DISCUSIÓN: Tomando los criterios para un marco de valor de la Health Technology Assessment International (2018)27 para la toma de decisiones y formulación de la recomendación, se describe: Se encontraron estudios observacionales y solo 01 revisión sistemática con metaanálisis, no se encontraron estudios diagnósticos. La calidad de evidencia evaluada con metodología GRADE fue baja en la mayoría de los estudios, considerando el diseño de estudio observacional, y por un bajo tamaño de muestra, pero tuvieron una adecuada selección de los casos por lo que no hubo variaciones en la puntuación. Esta valoración de la calidad indica que los valores diagnósticos encontrados pueden ser sustancialmente diferentes al efecto que pueda tener en el mundo real. Por otro lado, la calidad del meta-análisis fue alta, considerando sobre todo el gran tamaño poblacional y buena selección de pacientes por lo que los valores diagnósticos pueden coincidir en el mundo real. La magnitud del beneficio es a favor, pues considerando que INEN es un centro de referencia nacional en el diagnóstico y manejo de enfermedades neoplásicas, se hace necesario contar con las tecnologías que permitan una mayor precisión en el diagnóstico de los pacientes y en el caso de los marcadores solicitados, permite una mejor utilización de los recursos (no sobretratar con procedimientos innecesarios en casos de LIE de bajo grado, no emplear quimioterapias en base a platino en CCCO, hacer un manejo y seguimiento adecuado en los tumores del estroma de cordones sexuales y tumores de las células de la granulosa). Así mismo, el contar con estos marcadores permite tener nuestra propia data sobre el diagnóstico de estas patologías que en el caso de cáncer de ovario, son poco frecuentes. El impacto económico de esta prueba para el INEN es incierto, es necesario realizar un análisis de impacto presupuestario para estimar cuantitativamente el gasto sanitario del uso de esta prueba en la población con cáncer de ovario y cuello uterino. La incorporación de estas tecnologías supone un impacto probablemente positivo en la equidad al considerar que poblaciones con enfermedades frecuentes y poco frecuentes puedan ser atendidas y diagnosticadas para un tratamiento adecuado, evitando el infradiagnóstico. CONCLUSIONES: Las neoplasias de ovario tienen una variedad de subtipos en las cuales algunas tienen características más agresivas que otras y también difieren en el manejo que se les puede brindar. Por tal razón un diagnóstico preciso de estas es necesario. - En los últimos años han surgido nuevos marcadores para la detección de estas neoplasias en las que se encuentran FOXL2, SF1 y HNF-1Beta, las cuales brindan mayor precisión a los paneles de marcadores ya disponibles. - En los casos de Tumores de la Granulosa difuso del adulto en los cuales haya duda diagnóstica versus un Fibroma de Ovario, la detección molecular de FOXL2 ha mostrado una alta sensibilidad y especificidad. Sin embargo su expresión en la IHQ no es del todo precisa. Al tratarse nuestra institución un centro de referencia, la adquisición de este reactivo podría hacer que se realicen estudios que permitan valorar estos resultados. En los casos de Tumores del estroma de cordón sexual, existe ya un panel reconocido para su diagnóstico, sin embargo el SF1 ha mostrado ser mucho más específico para este tipo de neoplasias, con valores de sensibilidad y especificidad del 100%. Por lo tanto, recomendamos incluir este marcador al panel de Inhibina y Calretinina. - Los Carcinomas de Células Claras de Ovario son un tipo raro dentro de las neoplasias epiteliales de ovario, lo resaltante de este tipo de carcinoma es su resistencia a drogas basado en platino por lo que su diagnóstico preciso es pertinente debido a que el manejo será distinto. Su diagnóstico es básicamente con hematoxilina y eosina, sin embargo algunas veces la mimetización de los otros subtipos de neoplasias epiteliales se puede confundir y es allí donde se hace necesario el uso de la IHQ. HNF-1Beta ha demostrado ser un marcador sensible y específico por lo cual se hace la recomendación de su uso en casos de duda diagnóstica. El cáncer de cuello uterino tiene una evolución natural a partir de lesiones. premalignas como son las lesiones intraepiteliales de alto grado: NIC2 - NIC3. En este contexto, políticas de salud se han desarrollado para el screening de pacientes a través de detección citológica y actualmente, mediante detección de VPH de alto riesgo para proceder con procedimientos que disminuyan la incidencia y mortalidad del cáncer de cuello uterino. Aún en nuestro medio se sigue realizando el screening con citología y se obtienen también muestras de biopsias, en ambos escenarios se puede realizar las tinciones de IHQ dual (KI67/P16) para la detección precisa de Lesiones intraepiteliales de Cuello uterino. La evidencia señala que la IHQ dual ha demostrado ser tan sensible como las pruebas de ADN de VPH de alto riesgo e incluso ser más específicas que estas. Por lo tanto, recomendamos el empleo de este marcador dual, ya que con esto se disminuiría el sobrediagnóstico y sobretratamiento de mujeres sanas, con los beneficios económicos para nuestra institución. El empleo de estos nuevos marcadores permitirían reducir tiempo en el procesamiento diagnóstico, optimización de tejido e insumos. - Se recomienda que los reactivos solicitados, de incorporarse, deban tener un registro SISMED. - Por lo expuesto, la UFETS en consenso con el Comité de ETS, emite opinión favorable para el uso de las tecnologías del marcador FOXL2, SF1, HNF-1B y P16/KI67 en el contexto del diagnóstico de Cáncer de Ovario y Lesiones premalignas de Cuello Uterino.

Reactivos de inmunohistoquímica para diagnóstico diferencial de cáncer de cabeza y cuello, estómago, páncreas y tumores neuroendocrinos / Immunohistochemical reagents for differential diagnosis of head and neck cancer, stomach, pancreas and neuroendocrine tumors

INTRODUCCIÓN: El Departamento de Equipo Funcional de Patología Quirúrgica y Necropsia del Instituto Nacional de Enfermedades Neoplásicas, en relación a nuevos reactivos de inmunohistoquímica para diagnóstico oncológico, ha solicitado la opinión técnica de la UFETS. En relación con el cáncer de cabeza y cuello: El carcinoma de la línea media NUT (Nuclear protein in testis) es altamente agresivo y esta normalmente confinada a las células germinales del testículo y ovario, sin embargo, surge con mayor frecuencia en el tórax y cabeza y cuello. Así mismo, Galectina-3 pertenece a la familia de lectinas que se unen a beta galactósido y está involucrada en la adhesión celular, la cual puede expresarse en el carcinoma tiroideo y diferenciarlo de lesiones tiroideas benignas. 3. En relación con el cáncer de estómago/páncreas/tumores neuroendocrinos del sistema gastrointestinal: La Proteína 1 homeobox1 pancreática y duodenal (PDX-1) es un gen que tiene un rol determinantemente regulador durante la formación del páncreas embrionario y juega un papel en la diferenciación del páncreas exocrino y regula la función de las células beta en el páncreas maduro. La Tripsina es la forma activa del tripsinógeno, enzima involucrada en el metabolismo de proteínas, que es producida por las células acinares del páncreas exocrino, siendo útil para carcinoma de páncreas con diferenciación acinar. La Quimiotripsina es una enzima involucrada en el metabolismo de proteínas, que es producida por células acinares del páncreas exocrino. Útil para carcinoma páncreas con diferenciación acinar. ESTRATEGIA DE BÚSQUEDA DE INFORMACIÓN: PREGUNTA CLÍNICA: Cáncer de Cabeza y Cuello: En la población con cáncer de cabeza y cuello, ¿Cuál es la utilidad de los marcadores Galectina 3/NUT como diagnóstico oncológico? Cáncer de Estómago/Pancreas/Tumores Neuroendocrinos del Sistema Gastrointestinal: En la población con cáncer de estómago/páncreas/tumores neuroendocrinos, ¿Cuál es la utilidad de los marcadores de PDX-1/Tripsina/Quimiotripsina como diagnóstico oncológico? B. RECOLECCIÒN DE LOS MANUSCRITOS A REVISAR: Tipos de estudios: La estrategia de búsqueda sistemática de información científica para el desarrollo del presente informe se realizó siguiendo las recomendaciones de la Pirámide jerárquica de la evidencia propuesta por Haynes y se consideró los siguientes estudios: Sumarios y guías de práctica clínica. Revisiones sistemáticas y/o meta-análisis. Ensayos Controlados Aleatorizados (ECA). Estudios Observacionales (cohortes, caso y control, descriptivos) No hubo limitaciones acerca de la fecha de publicación o el idioma para ningún estudio. Fuentes de información: De acceso libre o Bases de datos: Pubmed Fecha de búsqueda: La búsqueda sistemática se limitó a estudios publicados en los últimos 10 años. DISCUSIÓN: Tomando los criterios para un marco de valor de la Health Technology Assessment International (2018)12 para la toma de decisiones y formulación de la recomendación, se describe: La calidad de evidencia evaluada con metodología GRADE para NUT y Galactin-3 fue moderada, y para PDX-1 fue baja la calidad de evidencia, en la evaluación de la calidad de evidencia se ha considerado las limitaciones de las RS (heterogenidad, imprecisión), y las limitaciones en estudios observacionales (inician con calidad baja). Esta valoración de la calidad indica que los valores diagnósticos encontrados pueden ser sustancialmente diferentes al efecto que pueda tener en el mundo real. La magnitud del beneficio es a favor, pues considerando que no existen pruebas en INEN que evalúen las patologías solicitadas (cáncer cuello y tiroides; cáncer páncreas, y pueden ser beneficiosos. Además la alta sensibilidad y especificidad permitiría captar a pacientes con estas patologías. El impacto económico de esta prueba para el INEN es incierto, es necesario realizar un análisis de impacto presupuestario para estimar cuantitativamente el gasto sanitario del uso de esta prueba en la población con cáncer de tumores sólidos localmente avanzado y metastásicos. La incorporación de esta tecnología supone un impacto probablemente positivo en la equidad al considerar que poblaciones con enfermedades frecuentes y poco frecuentes puedan ser atendidos y diagnosticados para un tratamiento adecuado, evitando el infradiagnóstico. Cáncer de cabeza y cuello: Los estudios que evaluaron NUT y Galactin-3, evaluaron en población con cáncer de cabeza y cuello. En NUT evaluaron la inmunohistoquímica(fijados en parafina) comparado con Fish. Encontraron que los tumores teñidos con NUT fueron principalmente carcinomas de aringe, cavidad oral y pulmón. Los tumores que fueron positivos revelaron típicamente una fuerte reactividad nuclear difusa (> 90%) en un patrón moteado, mientras que los casos negativos carecían de reactividad nuclear. La sensibilidad y especificidad de NUT fue 87% y 100% para diferenciar carcinomas de línea media NUT de otros tumores de células no germinales. En Galactina-3 se encontró un MA que evaluó la confiabilidad histológica de galectina3 para identificación de cáncer de tiroides. Este MA realizó una búsqueda en base de datos hasta mayo del 2017. Incluyeron 52 artículos originales (todos retrospectivos). La sensibilidad de Galectina-3 fue del 87% (IC 95: 86% a 88%) y la especificidad del 87% (IC 95%: 86% a 88%). Concluyen que con estos datos se muestra una alta confiabilidad de Galectina-3 para el cáncer de tiroides en histología, y distinguirlo de tumores de tiroides benignos. Este MA presentó heterogeneidad (85% y 93%, para sensibilidad y especificidad) así como sesgo de publicación significativo El departamento solicitante añadió que Galactina-3 y junto con el marcador I67 refuerza el diagnóstico para carcinoma tiroideo y carcinoma de paratiroides. Cáncer de estómago/páncreas/tumores neuroendócrinos: El estudio que evalúa el uso de PDX-1 analizó su uso en tumores neuroendocrinos (TNE) y no TNE de diferente localización y origen histogenético. PDX-1 fue positivo en tres de cuatro TNE pancreáticos, presente en todos los insulinomas, gastrinomas y somastotatinomas. PDX-1 fue negativo en otros cánceres que no eran de origen gástricos. La expresión de PDX-1 es muy sensible para la mayoría de los TNE pancreáticos y no es positiva cuando no son tumores de origen pancreáticos. En un estudio se evaluó tripsina y quimiotripsina encontró que estas dos pruebas pueden detectar hasta un 95% de carcinoma acinar pancreático, sin embargo, el nivel de confianza de este artículo es de baja calidad pues es una revisión narrativa. El departamento solicitante añadió que el PDX-1 un cáncer primario metastásico no conocido, puede determinar si el origen es de origen neuroendocrino pancreático y diferenciarlo de uno de origen colónico o de apéndice. Tripsina y quimiotripsina. CONCLUSIONES: Dentro de la búsqueda, se encontró evidencia del uso de los marcadores para cáncer de cabeza y cuello (NUT y galectina-3) y en cáncer de estómago/páncreas/tumores neuroendocrinos (PDX-1, tripsina y quimiotripsina). NUT logró tener una sensibilidad del 87% y especificidad del 100% para detección de carcinoma de linea media NUT. Galectina-3 para identificación de cáncer de tiroides obtuvo una sensibilidad de 87% y especificidad del 87%. Un estudio evidenció que el uso de PDX-1 es útil para diagnóstico de tumores neuroendocrinos pancreáticos. El diagnóstico de carcinoma acinar pancreático, el uso de tripsina y quimotripsina fueron reactivos en el 95% de los casos y, según se informa, la combinación es la más sensible para el diagnóstico de esta patología. Los estudios encontrados tienen como principal limitación el no ser comparado con pruebas estándares, y ser estudios observacionales descriptivos. Se recomienda que los reactivos solicitados, de incorporarse deban tener un registro SISMED. Por lo expuesto, la UFETS en consenso con el Comité de ETS, emite opinión favorable para el uso de la tecnología del marcador PDX-1.

Reactivos de inmunohistoquímica para diagnóstico diferencial oncológico de neoplasias del sistema nervioso central / Immunohistochemical reagents for differential cancer diagnosis of central nervous system neoplasms

INTRODUCCIÓN: El Departamento de Equipo Funcional de Patología Quirúrgica y Necropsia del Instituto Nacional de Enfermedades Neoplásicas, en relación a nuevos reactivos de inmunohistoquímica para diagnóstico oncológico de tumores del sistema nervioso central, ha solicitado la opinión técnica de la UFETS. 2. Existen neoplasias del sistema nervioso central que presentan una pobre respuesta al tratamiento estandarizado y un peor pronóstico, por lo cual ameritan un diagnóstico eficaz y temprano. Los marcadores para inmunohistoquímica H3 K27M, H3 K27m3, GAB-1, YAP-1, H3.3G34R y MAP-2 permitirían un diagnóstico más eficaz e incluso influiría en su tratamiento y seguimiento. Estrategia de búsqueda de información: a) Pregunta Clínica: Sección A: SNC: En la población con tumores de SNC, ¿Cuál es la utilidad de los marcadores de H3 K27m3, GAB-1, YAP-1, H3.3G34R y MAP-2 como diagnóstico oncológico en tumores del SNC? b) Recolecciòn de los Manuscritos a Revisar: Tipos de estudios: La estrategia de búsqueda sistemática de información científica para el desarrollo del presente informe se realizó siguiendo las recomendaciones de la Pirámide jerárquica de la evidencia propuesta por Haynes y se consideró los siguientes estudios: Sumarios y guías de práctica clínica. Revisiones sistemáticas y/o meta-análisis. Ensayos Controlados Aleatorizados (ECA) Estudios Observacionales (cohortes, caso y control, descriptivos) No hubo limitaciones acerca de la fecha de publicación o el idioma para ningún estudio. DISCUSION: Tomando los criterios para un marco de valor de la Health Technology Assessment International (2018)13 para la toma de decisiones y formulación de la recomendación, se encontró una serie de estudios de los cuales no se encontraron revisiones sistemáticas ni estudios diagnósticos. La calidad de evidencia evaluada con metodología GRADE fue baja en todos los estudios evaluados, considerando el diseño de estudio observacional, y por el pequeño tamaño de las muestras estudiadas. Esta valoración indica que los resultados obtenidos en el mundo real por la aplicación de estas tecnologías pueden ser significativamente diferentes a los resultados diagnósticos de los estudios presentados. Los estudios que evaluaron el H3K27M y H3K27me3 evaluaron la utilidad diagnóstica de los anticuerpos para detección de estas mutaciones. El diagnóstico de glioma de línea media con mutación K27M permite reconocer una entidad de peor pronóstico y sólo se logra con la aplicación de estos marcadores. Si bien existe una cantidad limitada de evidencia, los estudios llevados por Tina Huang y col. evaluaron el rendimiento diagnóstico de estos marcadores comparándolos con estudios de mutación en muestras de tejido con diagnóstico de glioma (n=69) y tejido sano (n=4) en población pediátrica. Otro estudio por Sriram Venneti y col. tomaron como población 290 muestras de cáncer con mutación H3F3A K27M conocida. Los estudios reportan una sensibilidad 100% y una especificidad 100% para el marcador H3K27M y Sriram Venneti reportó una sensibilidad 100% y especificidad 98% para H3K27me3. Ambos marcadores cuentan con una utilidad diagnóstica importante su aplicación permitiría diagnosticar precozmente una enfermedad con mal pronóstico en edad pediátrica y adulta. El GAB-1 y el YAP-1 intervienen en el proceso de desarrollo del cáncer a nivel de sistema nervioso central. La detección de ambas mutaciones por inmnohistoquimica permite la clasificación molecular del meduloblastoma en SHH, WNT y no-SHH/WNT. El determinar el subtipo molecular es importante ya que cada uno cuenta con un pronóstico diferente y su reconocimiento permitiría realizar un mejor diagnóstico y hasta influir en el tipo de tratamiento que recibiría. David W. Ellison y su equipo reconocer al meduloblastoma como una enfermedad heterogenea y a través de inmunohistoquímica determinan los subtipos de meduloblastoma en una cohorte de 235 muestras en pacientes de un rango de edad 0.4 ­ 52 años. Los subtipos moleculares SHH, WNT, y no SHH/WNT correspondían al 31%, 14%, y 55% de los casos. Hye Sook Min y col. evaluaron la detección de mutaciones a través de anticuerpos para inmunohistoquímica en cada subtipo molecular de meduloblastoma. El GAB-1 fue hallado en el 100% de los subtipos SHH y en sólo el 25% del subtipo WNT. El YAP-1 se encontró en el 50% de los subtipos WNT, el 80%de SHH y sólo el 2% en los subtipos no-SHH/WNT. Ambos marcadores son relevantes para poder clasificar adecuadamente cada subtipo molecular de meduloblastoma. Las mutaciones H3.3G34R y MAP-2 están asociadas con la progresión de enfermedad oncológica. Farhana Haque y col. evaluaron la eficacia de la inmunotinción para la detección de H3.3G34R en una cohorte de 22 muestras de tumores incluidos en parafina con mutación H3.3 G34R conocida. 17 eran tumores supratentoriales de alto grado, 2 gangliomas anaplasicos, 2 oligoastrocitomas grado III y 1 glioma de alto grado. La IHC detectó con éxito la proteína mutante correspondiente en todos los casos (11/11 G34R). Los resultados demostraron una concordancia adecuada entre estudio diagnóstico con inmunohistoquímica y estudio mutacional correspondiente. Se reportó una sensibilidad del 100% y especificidad del 98% para diagnóstico. Con respecto al estudio de inmunohistoquímica del MAP-2, Ingmar Blümcke y su grupo de estudio demostraron que el análisis por inmunohistoquímica presentó una sensibilidad del 98% y una alta especificidad para la detección de esta mutación, la cual está asociada con la progresión de tumores astrocíticos de alto grado en el sistema nervioso central. En este momento el INEN no cuenta con marcadores que puedan diagnosticar los gliomas de línea media con mutación K27M, una entidad de pobre repuesta al tratamiento y peor pronóstico y que por ende ameritaría un diagnóstico precoz. De la misma forma, la clasificación molecular de los meduloblastomas es algo importante. Cada subtipo molecular cuenta con un pronóstico diferente lo cual podría impactar en el tratamiento y la forma de seguimiento de los pacientes. Tampoco se cuenta con una forma de detección de la mutación 3.3 G34R y el MAP-2 cuenta con una alta eficacia diagnóstica para el diagnóstico de astrocitomas de alto grado. Ninguno de estos procedimientos diagnósticos está siendo realizado en este momento por lo cual la aplicación de estos marcadores supone un impacto positivo al considerar la población de pacientes diagnosticados que contarían con un tratamiento adecuado. Todos estos marcadores se integrarían al arsenal diagnóstico, sin reemplazar otro marcador que ya se esté aplicando en el INEN. El impacto económico de esta prueba para el INEN es incierto y es necesario realizar un análisis de impacto presupuestario para estimar cuantitativamente el gasto sanitario del uso de esta prueba en la población con linfomas. CONCLUSIONES: Algunas patologías oncológicas del sistema nervioso centran tienen una mala respuesta al tratamiento convencional, lo cual les da un peor pronóstico y un curso más agressivo. Los marcadores H3 K27M y H3 K27m3 presentan una alta sensibilidad y especificidad para el diagnóstico de gliomas de la línea media con mutación K27M. Esta entidad cuenta con una peor respuesta a tratamiento y peor pronóstico. Su detección temprana podría permitir un mejor tratamiento y optimizar las pautas de seguimiento. Los marcadores H3.3G34R y MAP-2 reconocen mutaciones que intervienen con el desarrollo del cáncer. Ambos cuentan con una alta sensibilidad y especificidad para el diagnóstico de tumores astrocíticos de alto grado. Los marcadores GAB-1 y YAP-1 se utilizan para determinar los subtipos moleculares de meduloblastoma, teniendo el GAB-1 una sensibilidad alta para el tipo SHH. Cada subtipo molecular de meduloblastoma cuenta con un pronóstico diferente lo cual podría influenciar en la forma de tratamiento que recibirían. Los marcadores de inmunohistoquímica permitirían un eficaz y temprano diagnóstico, lo cual influiría positivamente en el pronóstico de los pacientes con estas patologías, las cuales hasta la fecha no han sido diagnosticadas adecuadamente.

Molecular Characterization of Testicular Germ Cell Tumors Using Tissue Microdissection.

Testicular germ cell tumors are among the most common malignancies seen in children and young adults. Genomic studies have identified characteristic molecular profiles in testicular cancer, which are associated with histologic subtypes and may predict clinical behavior including treatment responses. Emerging molecular technologies analyzing tumor genomics, transcriptomics, and proteomics may now guide precision management of testicular tumors. Laser-assisted microdissection methods such as laser capture microdissection efficiently isolate selected tumor cells from routine pathology specimens, avoiding contamination from nontarget cell populations. Laser capture microdissection in combination with next generation sequencing makes precise high throughput genetic evaluation effective and efficient. The use of laser capture microdissection (LCM) for molecular testing may translate into great benefits for the clinical management of patients with testicular cancers. This review discusses application protocols for laser-assisted microdissection to investigate testicular germ cell tumors.

Preparing Cell Smears for Staining.

Increasing use is being made of cell smears for cell-staining studies. Suspension cells can be attached to slides by drying, and cell smears can also be prepared from biopsy samples, such as needle aspirates, tissue scrapings, or freshly dissected tissues. In these procedures, a thin layer of cells is deposited on a dry slide by physical methods. The most important factor in obtaining good staining patterns is that the smear be only a single cell thick. Tissue smears do not preserve tissue architecture, but are useful for identifying pathological changes and infectious organisms in tissue samples. Cell smears are easily prepared and can be fixed readily by any of the methods used for attached cells.

Reactivos de inmunohistoquímica para el diagnóstico diferencial de pacientes oncológicos: cáncer de pulmón, de piel no melanoma y de próstata / Immunohistochemical reagents for the differential diagnosis of cancer patients: lung, non-melanoma skin and prostate cancer

INTRODUCCIÓN: El Instituto Nacional de Enfermedades Neoplásicas (INEN), al ser la entidad de Perú de máxima complejidad para el manejo de enfermedades oncológicas, necesita contar con diversos exámenes de diagnóstico diferencial. 2. Consciente de ello, el Departamento del Equipo Funcional de Patología Quirúrgica y Necropsia del Instituto Nacional de Enfermedades Neoplásicas, realizó una solicitud de nuevos reactivos de inmunohistoquímica para diagnóstico oncológico. 3. El presente informe incluye en un primer momento la revisión rápida realizada a los grupos de reactivos de inmunohistoquímica de cáncer de pulmón (BAP 1 y BER-EP4), cáncer de piel no melanoma (BER-EP4) y cáncer de próstata (NKX3.1 y ERG). Para ello; se realizó una búsqueda sistemática, un análisis, síntesis de la evidencia y conclusiones para cada uno de los reactivos de inmunohistoquímica. Sección: Cáncer de Piel no Melanoma: En pacientes con cáncer de piel no melanoma, ¿Cuál es la utilidad de las pruebas de inmunohistoquímica de BER-EP4? Sección: Cáncer de Próstata: En pacientes con cáncer de próstata ¿Cuál es la utilidad de las pruebas de inmunohistoquímica de ERG y Nkx3.1? ESTRATEGIA DE BÚSQUEDA DE INFORMACIÓN: a) Pregunta Clínica: Sección A: Cáncer de Pulmón: En pacientes con cáncer de pulmón, ¿Cuál es la utilidad de las pruebas de inmunohistoquímica de BAP 1 y BER-EP4? b) Recolecciòn de los Manuscritos a Revisar: Tipos de estudios: Tipos de estudios: La estrategia de búsqueda sistemática de información científica para el desarrollo del presente informe se realizó siguiendo las recomendaciones de la Pirámide jerárquica de la evidencia propuesta por Haynes y se consideró los siguientes estudios: Sumarios y guías de práctica clínica. Revisiones sistemáticas y/o meta-análisis. Ensayos Controlados Aleatorizados (ECA). Estudios Observacionales (cohortes, caso y control, descriptivos) No hubo limitaciones acerca de la fecha de publicación o el idioma para ningún estudio. DISCUSIÓN: Tomando los criterios para un marco de valor de la Health Technology Assessment International (2018)22 para la toma de decisiones y formulación de la recomendación, se describe: La calidad de evidencia evaluada con metodología GRADE para los marcadores BAP1, BER-EP4, ERG, NKX3.1 tuvieron valoración de baja a muy baja. Esta valoración de la calidad indica que los valores diagnósticos encontrados pueden ser sustancialmente diferentes al efecto que pueda tener en el mundo real. La magnitud del beneficio es a favor, pues considerando que no existen pruebas en INEN que evalúen las patologías solicitadas (diagnósticos diferenciales en cáncer de pulmón, cáncer de piel no melanoma y cáncer de próstata) pueden ser beneficiosos. Además, en algunos casos tener estos marcadores inmunohistoquímicos permitiría captar a pacientes con estas patologías y brindar un tratamiento más dirigido. El impacto económico de esta prueba para el INEN es incierto, es necesario realizar un análisis de impacto presupuestario para estimar cuantitativamente el gasto sanitario del uso de esta prueba en la población con cáncer de tumores sólidos localmente avanzado y metastásicos. La incorporación de esta tecnología supone un impacto probablemente positivo en la equidad al considerar que poblaciones con enfermedades frecuentes y poco frecuentes puedan ser atendidos y diagnosticados para un tratamiento adecuado, evitando el infradiagnóstico. CONCLUSIONES: Con respecto a BAP1 en cáncer de pulmón se realizó una búsqueda sistemática que encontró 130 resultados a los cuales luego de una revisión de título y resumen se decidió incluir 04 estudios (03 estudios primarios y una RS). En base a ellos podemos establecer que una prueba de IHQ de BAP1 nos permite diferenciar los mesoteliomas malignos de reacciones benignas en cáncer de pulmón. Con respecto a BER-EP4 en cáncer de pulmón se realizó una búsqueda sistemática que encontró 55 resultados a los cuales luego de una revisión de título y resumen se incluyó 02 estudios. Los estudios incluidos no son concluyentes con respecto a la utilidad de BER-EP4 en cáncer de pulmón y que su utilidad ha sido estudiada sobre todo en diferenciar mesotelioma maligno y adenocarcinoma pulmonar y en algunos casos es necesario ser utilizado con otros anticuerpos discriminantes. Con respecto a BER-EP4 en cáncer de piel no melanoma se realizó una búsqueda sistemática que encontró 47 resultados a los cuales luego de una revisión de título y resumen se incluyó 04 estudios. Basado en dichos estudios se encontró BER-EP4 es de utilidad se esté buscando establecer un diagnóstico diferencial entre carcinoma de células basadas y carcinoma escamoso. Con respecto a Nkx3-1 en cáncer de próstata se realizó una búsqueda sistemática que encontró 268 resultados de los cuales luego de una revisión de título y revisión se decidió incluir 02 estudios. Los estudios revisados nos permiten establecer que este marcador es de utilidad para diferenciar el carcinoma prostático del carcinoma urotelial. Con respecto a ERG en cáncer de próstata se realizó una búsqueda sistemática que encontró 1296 resultados dentro de los cuales hubo 14 revisiones sistemáticas/ metanálisis y luego de una revisión se tituló y resumen se incluyó 01 estudios. El estudio que evaluó la utilidad de este marcador en diferentes escenarios establece la posibilidad de que este marcador sea útil como parte de un panel para la detección de carcinoma prostático metastásico. Por lo expuesto, la UFETS en consenso con el Comité de ETS, emite opinión favorable para el uso de la tecnología del marcador BAP1 y BER-EP4 en el diagnóstico diferencial de mesotelioma maligno; el uso de BER-EP4 en el caso de probable diagnóstico de carcinoma de células o carcinoma escamoso y el uso de los marcadores Nkx3.1 y ERG cuando se investigue a una neoplasia metastásica de probable origen prostático.

Immunohistochemical identification of T and B lymphocytes in formalin-fixed paraffin-embedded chicken tissues using commercial antibodies.

Immunohistochemical method to detect avian lymphocytes is an efficient and reliable tool for accurate diagnosis, and immunological analysis of avian diseases. However, there are scarce studies reporting immunohistochemistry (IHC) using commercially available antibodies in formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) chicken tissues. In the present study, we established an immunohistochemical method to identify chicken T and B lymphocytes in FFPE chicken tissues using commercial antibodies against chicken or human antigens. For this IHC method, the five tested anti-T lymphocyte antibodies reacted with chicken T lymphocytes on the FFPE sections. Further, 10 commercial anti-B lymphocyte antibodies were tested; of these, three successfully detected chicken B lymphocytes for IHC. In particular, anti-human CD3 (clone F7.2.38) antibody was most suitable for the detection of chicken T lymphocytes, whereas anti-chicken B cell activating factor receptor (BAFF-R) antibody (clone 2C4) was most suitable for the detection of chicken B lymphocytes under our IHC staining conditions. These two antibodies reacted with numerous lymphocytes of all representative lymphoid tissues without problematic background staining and nonspecific reactions. Our results indicate that T and B lymphocytes in FFPE chicken tissues can be immunohistochemically detected using commercial antibodies.

In Vivo Analysis of Glial Immune Responses to Axon Degeneration in Drosophila melanogaster.

Axon degeneration elicits a range of immune responses from local glial cells, including striking changes in glial gene expression, morphology, and phagocytic activity. Here, we describe a detailed set of protocols to assess discrete components of the glial reaction to axotomy in the adult nervous system of Drosophila melanogaster. These methods allow one to visualize and quantify transcriptional, morphological, and functional responses of glia to degenerating axons in a model system that is highly amenable to genetic manipulation.

Detecting ß-Galactosidase-Labeled Cells.

ß-Galactosidase has been used extensively both as a label in enzyme immunoassays and for immunocytochemistry. One good substrate is 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-ß-d-galactopyranoside (X-gal), which gives an intense blue product. The product is stable and insoluble in alcohol as well as H2O.

A proof-of-concept analysis of carbohydrate-deficient transferrin by imaged capillary isoelectric focusing and in-capillary immunodetection.

Carbohydrate-deficient transferrin (CDT) is a reliable biomarker for chronic alcohol abuse. We developed a method for CDT analysis by capillary isoelectric focusing, followed by immunodetection directly in the capillary, in an automated fashion and on a single platform (Peggy Sue™; ProteinSimple, CA, USA). Transferrin glycoforms in serum samples, including disialo-transferrin, were separated and their apparent isoelectric points and relative percentages were determined. The relative CDT values (percent of total transferrin) matched expected values for both healthy and alcoholic samples. Because the method leveraged the sensitivity of an immunoassay, CDT was measured when serum samples were diluted up to 1200-fold, reducing the volume of serum required. Finally, the process is fully automated, with up to 96 samples analyzed per batch.

Role of TFF3 as an adjunct in the diagnosis of Barrett's esophagus using a minimally invasive esophageal sampling device-The CytospongeTM.

The incidence of esophageal carcinoma continues to increase whilst its prognosis remains poor. The most dramatic reduction in mortality is likely to follow early diagnosis of the preinvasive precursor lesion, Barrett's esophagus (BE), coupled with treatment of dysplastic lesions. The major risk factor for BE is gastroesophageal reflux disease, however this is highly prevalent and only a small proportion of individuals have BE, therefore an endoscopy-based screening strategy to detect BE is unfeasible. Minimally invasive esophageal sampling devices offer an alternative, cost-effective strategy which can be deployed within an at-risk population in a primary care setting to identify individuals with probable BE who can then be referred for endoscopic confirmation. The device that has currently progressed furthest in clinical trials is the CytospongeTM which collects cells from the gastric cardia, gastroesophageal junction and along the whole esophageal length. The cell sample is processed into a formalin-fixed paraffin-embedded block and sections assessed for the presence of intestinal metaplasia. TFF3 immunohistochemistry has consistently been shown to be a valuable adjunct that increases the accuracy of the CytospongeTM test by highlighting early goblet cells which may be missed on morphological assessment and by allowing pseudogoblet cells to be differentiated from true goblet cells.

Interlaboratory concordance in HER2 testing: Results of a Serbian ring-study.

PURPOSE: The purpose of this study was to assess the immunohistochemistry and chromogenic in situ hybridization (CISH) inter-laboratory consensus between national pathology laboratories in Serbia. METHODS: This study was conducted between 2013 and 2016. In 2013, HER2 results were evaluated using two sets of four different breast cancer specimens in five laboratories. A total of 20 immunohistochemistry and 20 CISH cases were tested. In 2014, there were 6 testing rounds, and a total of 24 specimens were analyzed, whereas in 2015 and 2016, seven testing rounds were conducted, with four additional cases (i.e. a total of 28 specimens). In 2014, 2015 and 2016, all institutions performed immunohistochemical analysis only. RESULTS: We found discrepan¬cies in HER2 immunohistochemical (IHC) results in all four surveys. IHC testing resulted in diagnostic discordance between participating centers in two (2/17) cases in 2013, two (2/24) in 2014, four (4/27) cases in 2015 and three cases (3/27) in 2016. The overall agreement among the centers was 79%, 85.5%, 83.5% and 89.4%, respectively. For CISH analyses, the results for 16 (84.2%) of 19 samples were consistent for all participants. Three results were found to be discordant, indicating a misdiagnosis rate of 15.8%. In all the discrepant cases, interinstitutional discordances were related to technical and evaluation issues. CONCLUSIONS: Our study highlights the difficulty encountered during HER2 testing using immunohistochemistry and CISH. This also emphasizes the need for rigorous quality control procedures for specimen preparation and analysis.

Membrane attack complex (C5b-9 complex or Mac), is strongly present in lesional skin from patients with endemic pemphigus foliaceus in El Bagre, Colombia.

BACKGROUND: El Bagre endemic pemphigus foliaceus (El Bagre-EPF) is a new variant of endemic pemphigus foliaceus present in the El Bagre area of Colombia, South America. Here, we investigate the presence of complement/C5-b9 in lesional skin of patients and matched controls from the endemic area. We also aim to compare the patient's autoantibody levels using indirect immunofluorescent titers (IIF) and correlate with the lesional presence of complement/C5b-9. METHODS: A case-control study was carried out by testing for the presence of complement/C5b-9 in lesional skin in 43 patients affected by El Bagre-EPF, as well as 43 matched, healthy controls from the endemic area. Skin biopsies were obtained and evaluated via hematoxylin and eosin staining, and immunohistochemistry. RESULTS: The presence of complement/C5b-9 was observed in all cases of the patients affected by El Bagre-EPF and was not observed in the controls from the endemic area (P < 0.001). The patients' autoantibody titers utilizing IIF for IgG and IgM showed correlation between higher autoantibody titers and stronger intensity of staining with complement/C5-b9 staining (P < 0.001). CONCLUSION: Patients affected by El Bagre-EPF have lesional deposition of complement/C5b, which correlates with disease severity and previously established serologies.

Weak Cytotoxic T Cells Activation Predicts Low-Grade Dysplasia Persistence in Ulcerative Colitis.

INTRODUCTION: In patients with ulcerative colitis (UC), dysplasia develops in 10%-20% of cases. The persistence of low-grade dysplasia (LGD) in UC in 2 consecutive observations is still an indication for restorative proctocolectomy. Our hypothesis is that in the case of weak cytotoxic activation, dysplasia persists. We aimed to identify possible immunological markers of LGD presence and persistence. METHODS: We prospectively enrolled 112 UC patients who underwent screening colonoscopy (T0) who had biopsies taken from their sigmoid colon. Ninety of them had at least a second colonoscopy (T1) with biopsies taken in the sigmoid colon and 8 patients had dysplasia in both examinations suggesting a persistence of LGD in their colon. Immunohistochemistry and real time polymerase chain reaction for CD4, CD69, CD107, and CD8ß messenger RNA (mRNA) expression and flow cytometry for epithelial cells expressing CD80 or HLA avidin-biotin complex were performed. Non-parametric statistics, receiver operating characteristic curves analysis, and logistic multiple regression analysis were used. RESULTS: Thirteen patients had LGD diagnosed at T0. The mucosal mRNA expression of CD4, CD69, and CD8ß was significantly lower than in patients without dysplasia (P = 0.033, P = 0.046 and P = 0.007, respectively). A second colonoscopy was performed in 90 patients after a median follow-up of 17 (12-25) months and 14 of the patients were diagnosed with LGD. In these patients, CD8ß mRNA expression at T0 was significantly lower in patients without dysplasia (P = 0.004). A multivariate survival analysis in a model including CD8ß mRNA levels and age >50 demonstrated that both items were independent predictors of dysplasia at follow-up (hazard ratio [HR] = 0.47 [95% confidence interval [CI]: 0.26-0.86], P = 0.014, and HR = 13.32 [95% CI: 1.72-102.92], P = 0.013). DISCUSSION: These data suggest a low cytotoxic T cell activation in the colonic mucosa of UC patients who do not manage to clear dysplasia. Thus, low level of CD8ß mRNA expression in non-dysplastic colonic mucosa might be considered in future studies about the decision making of management of LGD in UC.

An Immunohistochemical Study of Gastric Mucosa and Critical Review Indicate that the Subepithelial Telocytes are Prelymphatic Endothelial Cells.

There are only a few studies regarding gut subepithelial telocytes (TCs). The telopodes, namely peculiar TCs' prolongations described on two-dimensional cuts, are not enough to differentiate this specific cell type. Subepithelial TCs were associated with the intestinal stem niche but a proper differential diagnosis with lymphatic endothelial cells (LECs) was not performed. In this study, we will critically review studies suggesting that distinctive TCs could be positioned within the lamina propria. Additionally, we performed an immunohistochemical study of human gastric mucosa to test the expression of D2-40, the lymphatic marker, as well as that of CD31, CD34, CD44, CD117/c-kit, α-smooth muscle actin (α-SMA) and vimentin in the gastric subepithelial niche. The results support the poorly investigated anatomy of intramural gastric lymphatics, with circumferential collectors located on both sides of the muscularis mucosae (mucosal and then submucosal) and myenteric collectors in the muscularis propria. We also found superficial epithelial prelymphatic channels bordered by D2-40+ but CD31-TC-like cells. Deep epithelial lymphatic collectors drain in collectors within the lamina propria. Blood endothelial cells expressed CD31, CD34, CD44, and vimentin. Therefore, the positive diagnosis of TC for subepithelial CD34+ cells should be regarded with caution, as they could also be artefacts, resulting from the two-dimensional examination of three dimensional structures, or as LECs. Lymphatic markers should be routinely used to discriminate TCs from LECs.